细胞系 - DGSO百科
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细胞系 百科内容来自于: 百度百科

细胞系(cell line)指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 也指可长期连续传代的培养细胞。(由此便引申出了后来的有限细胞系(FiniteCellLine)、无限细胞系(InfiniteCellLine)),因此,细胞系狭义的是指可连续传代的细胞(特定环境下口语和书面语都使用),广义是指可传代的细胞

简介

经过40-50次分裂的渡过第二次死亡危机的细胞,称之为细胞系。如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系(FiniteCellLine);已获无限繁殖能力的细胞系,称连续或无限细胞系
建立细胞系流程图
(InfiniteCellLine)。无限细胞系大多已发生异倍化,具异倍体核型,可能成为恶性细胞,因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有永生性(不死性),但仍保留接触抑制和无异体接种致死;有的有永生性,异体接种有致瘤性,说明已恶性化。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系,称亚系(Subline)。

概念分歧

现行的人教社大纲版选修教材中是这样介绍细胞株和细胞系的:
原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了,细胞的生长就会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去,这些存活的细胞一般能够传到40--50代,这种传代细胞叫做细胞株。细胞株的遗传物质没有发生改变。当细胞传至50代以后又会出现“危机”,不能再传下去。但是有部分细胞的遗传物质发生了改变,并且带有癌变的特点,有可能在培养条件下无限制地传代下去,这种传代细胞称为细胞系。
GENE 细胞系
在一些别的资料中,细胞株和细胞系的概念与我们教材上的说法正好相反。课标教材没有再介绍这一对概念。这又是为什么呢?人教社编辑包春莹老师(bcying)对这一疑点的解释:细胞系和细胞株,两者曾一度混用,导致有些文献中概念不清。下面所指的概念是2013年国内外比较通用的,也是绝大多数研究者接受的观点。
原代培养物经首次传代成功即称为细胞系(CellLine),因此细胞系可泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系,不能连续培养的称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株(CellStrain),也就是说,细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。

肿瘤细胞

这是现有细胞系中最多的一类,中国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌建成,多呈类上皮型细胞,常已传几十代或百代以上,并具有不死性和异体接种致瘤性,丧失接触抑制能力。
对已建成的各种细胞系或细胞株习惯上都给以名称;细胞的命名无严格统一规定,大多采用有一定意义缩写字或代号表示。但不论什么形式,均不宜太长,以便记忆和了解,今别举以下几种代表性的细胞名称供参考
X射线诱导4种细胞系的DNA损伤与剂量的关系
HeLa:为供体患者的姓名(来源于宫颈癌)
CHO:中国地鼠卵巢细胞(ChineseHamsterOvary)
宫-743:宫颈癌上皮细胞,1974年3月建立
NIH3T3:美国国立卫生研究所(NationalInstituteofHealth)建立;每3天传代,每次接种3×10 5细胞/毫升。

建立要求

什么样的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞,视具体情况而定,无统一规定。对于用作原代培养的细胞只要供体均一,取材部位及组织种类等条件稳定即可,如用做长期培养,特别是反复传代的细胞,常需做如下说明:
1、组织来源:细胞供体所属物种,来自人体或者动物;个体性别、年龄;取材的器官或组织。如系肿瘤组织,应说明临床和病理诊断,以及病历号等。
2、细胞生物学检测:
了解细胞一般和特殊的生物学性状,如细胞一般形态,特异结构,细胞生长曲线和分裂指数,倍增时间,接种率等。如为肿瘤细胞,为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性,须做软琼脂培养,异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。
3、培养条件和方法;应说明细胞系(或株)适应的生存环境,即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。

建株要点

肿瘤细胞培养技术要点
1、取材:材料主要来源于外科手术或活检瘤组织,取材时避免用坏死组织,要挑选瘤细胞集中和活力较好的部位,瘤性转移淋巴结或胸腹水是较好的培养材料。取材后尽快培养,因故不能立即培养者,可冻存。其培养方法及冻存方法同前述正常组织。
2、成纤维细胞排除:在肿瘤组织中常混杂有一些成纤维细胞,培养时能与瘤细胞同时生长,并常压过癌细胞,导致癌细胞生长受阻以至消失,应仔细排除。排除方法常有:机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法、胶原酶消化法等。
红细胞系
3、提高肿瘤细胞培养存活率和生长率
根据实验经验,肿瘤细胞在体外不易培养,建立能传代的肿瘤细胞系更为困难。一般当肿瘤组成或细胞被原代培养后,要经过对新环境的适应才能生长,因此不能局限于一般培养法,须采用一些特殊措施。如:用适宜底物,鼠尾胶原底层及饲细胞底层等。用细胞生长因子,根据细胞种类不同选用不同的促细胞生长因子,如胰岛素、氢化可的松,雌激素等。也可以考虑动物媒介培养。

淋巴母

l、4ml肝素抗凝血于离心管中,加入2mlRPMI1640。
2、混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上静置30min。
3、1500rpm,15min,吸取白细胞层(第二层)于另一离心管中。
4、加RPMI16405ml洗涤白细胞两次。
5、将白细胞接种至1mlRPMI1640培养基中,加入10μl环胞霉素和100μl的EBV(EB病毒)液,混匀。
6、水浴摇床,40次/分,37℃,3hr。
7、1500rpm,15min。将细胞接种至1ml培养基中(内含谷氨酰胺1mM/ml)加入10μl环胞霉素,轻轻混匀,37℃培养。
8、5天后观察细胞转化和生长情况,决定是否半量换液。一般半量换液l—2次,并维持环胞霉素的浓度
9、待转化细胞数量明显上升,并出现细胞团块后,可转入25ml细胞培养瓶中,加1—2ml培养基,37℃培养10—15天,一般每隔3—4天观察一次,决定是否换液,传代。
10、细胞生长达一定数量后冻存,冻存前应进行核型分析和存档。

鉴定管理

国际惯例

当一个细胞系建成后,中国常通过组织专家开鉴定会的形式予以鉴定,从学术角度考虑,此举实非必要。按国际惯例,只要研究认真负责地把有关资料杂志刊物上报道,详细介绍上述各项目即可。
以前因未建立统一的细胞库时,对已建立的细胞系(株)多由作者单位自行保管,有浪费人力、交流使用不便、细胞易污染和丢失等弊病。我国已初建成小规模贮存细胞机构,待获进一步发展,这对我国细胞培养必将有更大促进作用。
细胞系中的应用

各国情况

国际上美、英和日本等国已建有细胞库;美国已有美国标准细胞库或细胞银行(ATCC)和人遗传突变细胞库(HGMR)、细胞衰老细胞库(CAR)等,其中ATCC不仅是美国也世界最大的细胞库。ATCC下属有一组协作实验室和一个由众多专家组成的咨询委员会。ATCC也是美国国立癌症研究所(NCI)和美国卫生研究所中(NIH)的资源库,尤与NCI有密切的关系。ATCC也是世界卫生组织WHO的国际培养细胞文献中心。ATCC现液冻存有3200个已经过鉴定的细胞系(1992),其中包括来自正常人和各种疾病患者的皮肤成纤维细胞系;和来自不同物种的近75个杂交瘤细胞株。ATCC接纳来自世界各国已经鉴定的细胞予以贮存,同时也向世界各国的研究者或实验室免费提供研究用细胞(做盈利性研究时收费。)

检测项目

ATCC接纳入库细胞时,必须符合其入库标准,ATCC入库细胞要求检测项目如下:
培养简历:组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等
冻存液:培养基和防冻液名称
细胞活力:融解前后细胞接种存活率和生长特性
培养液:培养基种类和名称(一般要求不含抗生素)、血清来源和含量
细胞形态:类型,如为上皮或成纤维细胞等,融解后细胞生长特性
核型:二倍体或多倍体,标记染色体的有无
无污染检测:包括细菌真菌支原体、原虫和病毒等
物种检测:检测同工酶,主要为G6PD和LDH,以证明细胞有否交叉污染以及反转录酶检测
免疫检测:一两种血清学检测
细胞建立者:建立者姓名;检测者姓名